實驗目的:通過對裸鼠腫瘤組織樣品的實驗研磨,可便于后續(xù)對樣品組織中蛋白的提取;再通過外泌體干預的荷瘤鼠模型中驗證,腫瘤的基因表達情況是否與蛋白測序結果一致。
實驗設備:冷凍組織研磨儀 JXFSTPRP-CLN-48
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理實驗研磨過程:
1.將小鼠通過注射麻醉劑慢慢失去知覺后,對小鼠進行解剖取小鼠身上的腫瘤塊?! ?/p>
2.取下腫瘤塊后在將腫瘤塊剪切成綠豆大小的塊狀,可先放入液氮或者-80℃的冰箱中方便后期研磨。
3.冷凍研磨儀開機,先將儀器制冷功能打開,溫度設置成-20℃,確保樣品在研磨時蛋白不會發(fā)生裂解?! ?/p>
4.研磨儀預設溫度達到后,將剛剛取好剪切后的樣品放入研磨管中,每個研磨管盡量放100mg左右,再往研磨管中加入4顆研磨珠,再加入蛋白提取液蓋上研磨管蓋,進行濕磨?! ?/p>
5.將研磨管放入適配器中,適配器再固定到研磨儀上。
6.設置研磨儀參數(shù),設置好研磨頻率和時間,研磨次數(shù)2次,研磨中斷時間15s,經過研磨后,再進行蛋白的提取?!?/p>
實驗操作注意事項:
1.研磨管放到適配器上,一定要注意研磨管的平面配平,否則會損壞研磨儀的寶塔。
2.適配器在放到研磨儀寶塔上時,固定螺母一定要固定緊,否則既會損壞研磨儀寶塔,還會對適配器底部造成損壞。
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理實驗研磨效果圖:
實驗結果:樣品經研磨后提取的蛋白含量充足。
冷凍組織研磨儀能在非常短的時間內將土壤、植物和動物的組織,器官等樣品完成研磨、粉碎。隨著近代醫(yī)學的發(fā)展,特別是腫瘤學和免疫學的需要,動物組織的研磨已經成為了實驗室不可缺少的一個環(huán)節(jié)。JXFSTPRP-CLN-48低溫研磨樣品,實現(xiàn)無交叉污染的同時,低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解、保留蛋白質活性。是實驗室樣品前處理的好幫手。